诊断标准
根据临床表现和实验室检查，母婴ABO血型不合，外加一项红细胞致敏的指标(改良直接Coombs试验或抗体释放试验)阳性，即可确诊。
1.产前诊断
(1)父母亲血型测定：凡既往有不明原因的流产，早产，死胎，死产史，或新生儿重症黄疸史的产妇，应警惕有无母婴血型不合，测定母亲和父亲的血型，父母血型不合者，应测定母亲的血型抗体。
(2)母亲血型抗体测定：怀疑胎儿可能发生溶血病的孕妇应进行抗血型抗体测定，第一次测定一般在妊娠第4个月进行，这可作为抗体的基础水平，以后每月测定1次，妊娠7～8个月每半个月测定1次，第8个月后每周测定1次，若抗体效价上升，起伏不定或由高转低者均提示小儿可能受累，当抗体滴度达1∶32时宜作羊水检查，由于自然界中存在类似A，B抗原的物质，母亲体内可存在天然的抗A或抗B抗体，通常将ABO溶血病的抗体效价1∶64作为可疑病例，母亲的抗体效价维持不变提示病情稳定。
(3)羊水检查：正常的羊水无色透明，重症溶血病羊水呈黄绿色，胎儿溶血程度愈重，羊水胆红素含量就愈高，故羊水胆红素含量可用来估计病情和决定终止妊娠，羊水在波长450nm处的光密度与羊水中胆红素含量呈一定相关比例，可用分光光度计测定羊水在波长450nm处的光密度代表羊水中胆红素的高低，由于羊水中胆红素的含量随孕周增加而降低，故在不同孕周所测得的光密度的升高数，有不同意义。
(4)影像学检查：全身水肿胎儿X线片可见软组织增宽的透明带，四肢弯曲度较差，B超检查显示胎儿肝脾大，胸腹腔积液。
2.生后诊断
(1)临床表现：观察新生儿有无贫血，水肿，黄疸和肝脾大等溶血症状，若有应考虑新生儿溶血病。
(2)实验室检查：对于出生时有水肿，贫血，出生后24h内出现黄疸及母亲为Rh阴性的新生儿应考虑新生儿溶血病，需做血常规，母婴血型，血清胆红素和Coombs试验。
鉴别诊断
1.全身水肿：引起新生儿全身水肿的原因，除溶血病外还有纯合子珠蛋白生成障碍性贫血(地中海贫血)，严重的先天性心脏病，大的动静脉畸形，先天性肾病，先天性肝炎，子宫内感染，母亲患糖尿病等，可通过临床表现和血清学检查与这些疾病鉴别。
2.生理性黄疸：ABO溶血病轻症仅出现轻度黄疸，易被视为生理性黄疸而需鉴别，生理性黄疸较本症出现晚，程度轻，不伴有贫血和肝脾大，无全身症状，外周血有核红细胞和网织红细胞不升高。
3.感染：败血症可引起贫血，黄疸，肝脾大，易与溶血病混淆，但败血症有中毒症状，体温变化，血清中结合胆红素亦增高，而无血型抗体等，可进行鉴别。
宫内其他感染，如巨细胞病毒，风疹病毒，单纯疱疹病毒等也可引起贫血，黄疸，肝脾大，但多伴有视网膜脉络膜炎，颅内钙化，血清相应IgM抗体阳性，Coombs试验阴性。
4.贫血：失血性贫血不伴有黄疸，血型抗体阴性，且常可找到失血的原因，易鉴别，主要应与其他原因引起的溶血性疾病相鉴别，包括葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺陷，丙酮酸激酶缺乏，己糖激酶缺乏，球形红细胞增多症，椭圆形红细胞增多症等，主要鉴别点为这些疾病Coombs试验阴性，并出现异形红细胞。
5.Rh溶血病。
