评价体内维生素B6水平的方法包括直接法(如血浆磷酸吡哆醛浓度、血浆总维生素B6浓度或尿维生素B6浓度测定)和间接法(尿色氨酸降解产物的水平、红细胞内依赖性维生素B6酶活性或血浆高半胱氨酸含量的测定)。
1.直接法
(1)血浆磷酸吡哆醛(PLP)浓度测定：血浆5-磷酸吡哆醛是肝脏维生素B6的主要存在形式，并且反映组织中的储存，但是血浆5-磷酸吡哆醛对该种维生素摄入量的反应相当缓慢，需要10天才能达到一个新的稳定状态。但在评价时应考虑可能影响PLP浓度的各种因素，如蛋白质的摄入增加，AKP的活性升高都可使血浆PLP浓度下降。目前是以20nmol/L血浆PLP浓度为评价维生素B6营养状况的指标。但胎儿体内5-PLP浓度非常高，出生后第1年内迅速降低，然后降低缓慢。所以评价新生儿及婴儿维生素B6的营养状况较困难。
(2)血浆总维生素B6浓度测定(包括游离维生素B6及吡哆醇磷酸盐)：本方法较为简单，是了解体内维生素B6营养状况的敏感指标，但是测定值的波动较大，因此限制了它的使用价值。
(3)尿中维生素B6浓度测定：尿中维生素B6排泄，特别是4-吡哆酸的排泄已被广泛用于研究维生素B6的需要量。吡哆酸的排泄量约占维生素B6摄入量的50%，4-吡哆酸的排出量反映近期膳食维生素B6摄入量的变化，正常尿内排泄4-吡哆酸量大于0.8mg/d，如果少于0.2mg/d，即表明维生素B6缺乏。
2.间接法
(1)尿中色氨酸降解产物的水平(尿色氨酸负荷试验)：尿中黄尿酸的排出量是维生素B6缺乏的最早标记物之一。正常情况下，黄尿酸是一种微量的色氨酸降解产物，色氨酸降解的主要途径是通过5-磷酸吡哆醛依存的犬尿氨酸酶。微量黄尿酸也涉及5-磷酸吡哆醛依存的酶。维生素B6缺乏时，色氨酸的代谢产物及衍生物生成增加，由尿排出体外。黄尿酸能可靠地反映维生素B6的营养状况，给予色氨酸负荷试验可以明确诊断，其法如下：口服50～100mg/kg色氨酸液(每次总量不超过2g)，通过测定色氨酸降解产物来评价维生素B6的营养状况，维生素B6缺乏患儿尿中可出现大量黄嘌呤酸，尿中黄尿酸排出量>50mg。正常人无此现象，但在维生素B6依赖病者此试验可能阴性。
(2)红细胞内依赖性维生素B6酶活性的测定：血清及红细胞谷草转氨酶降低。红细胞内需要PLP酶，如谷丙酮酸转氨酶(EGPT)、谷草酰乙酸转氨酶(EGOT)、天门冬氨酸转氨酶(α-EAST)等，也是评价体内维生素B6营养状况的敏感指标。常将红细胞加和不加PLP之比作为评价维生素B6营养状况的指标，加上PLP测定谷丙或谷草转氨酶的活性，如活性上升20%以上，表明维生素B6缺乏。
EGOT指数=EGOT+PLP/EGOT-PLP
EGPT 指数=EGPT+PLP/EGPT-PLP
EGOT活性指数≤1.80为正常，EGPT活性指数≤1.25为正常。最近也有人测定天门冬氨酸酶的活性作为评价维生素B6营养状况的指标，但测定数值变异较大，使其受到了限制。
(3)血浆高半胱氨酸的含量：最近提出以血浆高半胱氨酸作为评价维生素B6营养状况的指标。因为高半胱氨酸的降解开始于转硫化到半胱氨酸的过程，涉及5-PLP依存酶。但最近有研究表明，叶酸和维生素B12与血浆高半胱氨酸的水平关系更密切。
应作心电图和脑电图等检查。脑电图检查有不正常频率及振幅改变的波形。
