1.流行病学史：密切接触史(急性肝炎病人与污染物品)及输血或血制品注射史等对诊断有一定参考价值。
2.实验室检测
(1)酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清抗-HCV：利用体外的各种HCV重组蛋白，已建立多种抗-HCV检测，第一代ELISA为 5-1-1和C-100作抗原，第二代ELISA增加了C22和C33蛋白，其灵敏度较第一代提高10%～30%，一般抗-C22出现最早，也最为常 见，C22免疫原性较好，对急性输血后丙型肝炎检测表明，潜伏期和急性期早期抗-HCV阴性，于ALT升高后2～52周抗-HCV阳转，目前已建立第三代 ELISA检测抗-HCV，该试剂增加了NS5蛋白，较第二代ELISA更为灵敏。
由于IgG抗体出现较晚，甚至HCV感染后1年才出现阳性，亦不能估计病毒复制状态，因此Quiroga等于1991年检测IgM抗-HCV，以后 相继亦有报告，目前认为，IgM抗-HCV在急性肝炎的检出率比IgG抗体略有提高(IgM抗-HCV为64%，IgG抗-HCV为57%)，在自限性经 过病例中，IgM抗-HCV消失，而在慢性化病例仍阳性，提示IgM抗-HCV可作为演变为慢性的指标，对指导抗病毒治疗有一定的价值。
(2)重组免疫印迹法(RIBA)检测HCV抗体：第一代ELISA法建立不久，为排除ELISA检测抗-C100假阳性，Chiron公司提供了 确证试验用的免疫印迹试验，也称第一代RIBA，RIBA的特异性较ELISA法有所提高，但敏感性却明显下降，目前已建立了第二代，第三代RIBA，其 阳性率较第一代RIBA明显提高。
(3)HCV抗原的检测：Krawczynski等从感染HCV的黑猩猩或病人血清中提取IgG组分，用异硫氰酸荧光素标记后作为探针，用直接免疫 荧光法检测肝组织内HCV抗原，作者检测4只急性和3只慢性丙型肝炎黑猩猩肝组织，HCV抗原均为阳性，用阻断试验和吸附试验证明，肝细胞内HCV抗原与 HCV引起的病毒性肝炎有关，该抗原是HCV感染的一种特异性形态标志，可作为HCV感染的实验室诊断方法之一，此外还可用免疫组化ABC法检测肝组织内 HCV抗原。
(4)HCV RNA的检测：HCV感染时，血清中病毒含量极低，用常规的分子杂交技术难以检测出HCV RNA，PCR技术是目前分子生物学领域中灵敏度最高的一项检测技术，已用于HCV RNA的检测，该法是判断HCV感染有无传染性的最可靠指标，特异性好，敏感性高，有利于HCV感染的早期诊断及评估疗效，但亦应注意由于敏感性高，操作 过程复杂，易污染而致假阳性的可能。
3.肝活体组织检查光镜和电镜检查，有一定的参考价值。
本病应与中毒性肝炎，胆囊炎，传染性单核细胞增多症，钩端螺旋体病，流行性出血热，脂肪肝，阿米巴肝病等引起的血清转氨酶或血清胆红素升高者相鉴别，淤胆型肝炎应与肝外梗阻性黄疸(如胰头癌，胆石症等)相鉴别。
