1.衣原体直接镜检和培养 针刺有波动感的淋巴结取得标本，涂片以姬姆萨，碘或荧光素标记抗体染色，镜下找衣原体和包涵体，但诊断成功率低;接种于发育的鸡胚卵黄囊或注入含单层McCoy细胞(Hela-229细胞，L929细胞，BHK-21细胞)恒温离心，培养后找包涵体，细胞培养和核酸扩增技术是衣原体检测的金标准。
2.Frei试验 用淋巴结脓液或猴体内分离培养制备的抗原，皮内注射，48h观察结果，该试验历史上对LGV的诊断有过价值。
3.血清学检查 补体结合实验(CF)敏感性高于Frei试验，但各种血清型的衣原体有交叉反应，活动性LGV感染CF滴度可达1∶64或更高，血清抗体可持续多年，检测结果结合临床表现，有助于诊断，微量免疫荧光试验(MIF)的敏感性和特异性更高，还可用来测定感染菌株的血清型别，高滴度衣原体L1-3抗体对诊断急性LGV有价值。
4.聚合酶链反应(PCR) PCR主要通过检测沙眼衣原体质粒或外膜蛋白(MOMP)DNA序列以明确各种血清型的衣原体感染，有很高的敏感性，在LGV，研究已表明，对于生殖器溃疡和淋巴结病变常由多种病原(包括HIV)造成的地区，PCR用于诊断LGV有其优势。
组织病理：淋巴结病理学检查对LGV是非特异性的，但有助于排除其他疾病，LGV淋巴结典型表现为感染性肉芽肿伴星状脓肿：中央坏死由淋巴细胞，内皮细胞和白细胞碎片组成，周围包绕有上皮样细胞带。
