实验室检查对确定肝脾肿大原因和判定肝脏功能极为重要，有时临床症状并不明显但化验检查已显肝功能异常，实验室检查对评估肝脏损害程度及其预后也是必不可少的。
1.血液检查
(1)血象：白细胞计数和细胞形态观察对感染性疾病，白血病有诊断价值，血红蛋白，红细胞减少，网织红细胞增加，提示溶血性贫血。
(2)血液胆红素定量，定性检查：对诊断黄疸伴有肝脾肿大是不可缺少的检查项目，测定血清胆红素浓度是新生儿肝大最常做的化验，新生儿期血液病是新生儿黄疸最常见原因之一，很多肝大伴有黄疸的病都需要与其鉴别，尤其在生后第1周内，若血清胆红素持续增高至生后2周以上，并且以直接胆红素增高为主，便应考虑为肝脏疾病。
(3)肝功能检查：肝功能，乙型肝炎表面抗原(HBsAg)，乙型肝炎核心抗原和E抗原的检查，对诊断新生儿肝炎综合征是否由乙型肝炎病毒引起，是重要的依据，肝功能试验中的脑磷脂絮状试验，硫酸锌浊度试验等，在新生儿期常不呈阳性反应，谷丙转氨酶和谷草转氨酶在心脏和肌肉组织中含量也较多，窒息缺氧后此类酶可大量释放至血流，乳酸脱氢酶在肝炎时增高，阻塞性黄疸时不增高，提示胆汁郁积的酶有碱性磷酸酶，亮氨酸氨基转肽酶和γ-谷酰转肽酶等，血清5′-核苷酸酶在胆道闭锁时也明显增高。
(4)病原学检查：血液细菌培养，病毒分离及特异性抗体的检测，可帮助确定引起感染的细菌和病毒的种类。
(5)其他试验：如疑有糖代谢异常者应测定血糖及糖耐量试验，为确诊血型不合溶血病须做抗人球蛋白直接试验，游离抗体测定和抗体释放试验，血清蛋白电泳，甲种胎儿蛋白，免疫球蛋白等检查可根据需要酌情选做。
2.骨髓检查 考虑有血液病或恶性细胞增生时应做骨髓穿刺，对诊断白血病，血小板减少性紫癜，疟疾等是很有价值的。
3.肝活组织检查 对诊断不明的肝脾肿大或疑为肿瘤者可考虑肝脾穿刺后取活体组织检查，对确定新生儿肝肿大的性质很有帮助，如确诊肝原发性肿瘤或继发性肿瘤，区别新生儿肝炎综合征和肝内胆管闭锁等。
1.B型超声检查 超声波检查可帮助确定肝脾的大小，特别在小儿腹胀严重而使肝脾触及不清时尤为必要，应用超声扫描可观察肝脏位置，形态，大小，检查横膈运动，显示肝脏与相邻器官的关系，超声波检查还可提供病因学资料，如新生儿肝炎时基本波型呈密集微波和密集微小波;新生儿肝癌为丛状波，迟钝波和出波衰减;肝脓肿可见液平段等，B型超声对肝囊肿，肝脓肿和肝肿瘤等肝内肿物的鉴别极有用，肝硬化，脂肪肝和淤血肝也能在超声图像下区别，胆囊超声波检查可发现胆总管囊肿的存在。
超声检查可以观察脾脏的位置，形态和大小，新生儿合作程度，腹肌紧张和腹水等因素对其影响较小，利用超声检查判断脾大较触诊更敏感和正确，并可显示内部结构，可区别淤血性脾肿大，淋巴肉芽肿，脾的原发性肿瘤和脾被膜下血肿等。
2.放射性核素检查 放射性核素检查也可用于肝脾肿大的诊断，胶体99mTc用于了解肝脏的位置，形态，大小和探测肝内有无占位病变，脾脏可与肝同时显影，脾功能正常时，脾影较肝右叶淡，脾功能亢进时，脾影可浓于肝影，对脾内占位病变和浸润病变的诊断，也很有用。
