（一）血，尿中有关激素测定
1．睾酮测定：男性血睾酮90％来自睾丸，它反映间质细胞的功能，正常成年男性血睾酮水平为10～35nmol/L（3～10mg/L，RIA法）。
2．双氢睾酮（DHT）正常青年男性血浆双氢睾酮水平约为睾丸酮的10％，约2nmol/L（0．5mg/L）左右（RIA法）。
3．24小时尿17-酮类固醇测定：尿17-酮类固醇主要来自肾上腺弱效雄激素或其代谢产物，仅40％为睾丸酮代谢产物，不能确切反映睾丸功能状态，故其结果宜结合临床分析。
4．血浆LH测定：成年男性LH正常值为5～10IU/L（RIA法），测定LH时应同时测定睾酮，若两者水平同时低下，提示下丘脑和垂体疾病；若血浆睾丸酮水平低下，LH水平升高者，则提示原发性睾丸功能不全。
5．血浆FSH测定：正常成年男性FSH范围是5～20IU/L，下丘脑-垂体轴正常者，若生精上皮破坏严重，其FSH水平则升高。
6．绒毛膜促性腺激素（HCG）刺激试验：HCG生物活性与LH相似，方法为肌肉注射HCG4000IU，每天一次，共4天，第5天抽血测睾酮，正常反应为血睾酮水平从正常值成倍地增加，基础值很低者应计算增加的绝对数，原发性性腺机能减低者，HCG刺激后，血睾酮无明显增高；而继发于垂体机能低下的睾丸间质细胞机能减低者，血睾酮明显增高。
7．氯芪酚胺（Clomiphene）试验100～200mg/d口服，正常人6天后LH及FSH成倍升高，垂体或下丘脑病变者，反应明显降低。
8．LRH兴奋试验：可反映垂体促性腺激素的储备量，方法为静脉注射LRH50μg，在0＇，15＇，30＇，120＇取血测LH及FSH，正常男性峰值在15＇～30＇出现，LH约升高2～5倍，FSH升高约2倍，垂体功能受损者本试验呈低弱反应，LH及FSH不升高；下丘脑病变本试验呈延迟反应，静脉滴注LRH7～14天后，垂体对LRH刺激的反应可恢复正常，原发性睾丸病，LH及FSH分泌有过高反应，如病变局限在曲细精管，FSH可异常升高，但LH反应正常。
（二）染色体性别分析
1．性染色体：取外周静脉血中淋巴细胞用荧光显带法作染色体核型分析，正常男性核型为46，XY，正常女性核型为46，XX，C带分析可在有丝分裂的中期识别有无Y染色体，G带分析有利于发现染色体畸形的类型。
2.性染色质：又称巴氏小体（Barr：body），可用口腔粘膜涂片查出，女性染色质为阳性，男性为阴性。
（三）精液检查
正常男性一次排精量为2～6ml，精子总数超过6千万，密度大于2千万／ml，活力和形态正常的精子应达60％以上。
（四）精子穿透宫颈粘液试验
精子能穿过宫颈粘液，有生育力，否则不育。
（五）抗精子抗体和抗精液浆抗体
若阳性，说明妇女生殖管道中存在这些抗体使精子凝集或抑制精子活动，引起不育症。
（六）睾丸活组织检查
可鉴别输精管阻塞和生精功能衰竭。
（七）精囊，输精管造影
可了解输精管道的阻塞情况。
（八）组织相容性Y抗原（H-Y抗原）
为男性特有，是比性染色体更为本质的性别识别标志，不存在于女性，有助于对两性畸形作病因分析，真两性畸形最常见是46，XX男性，在细胞遗传学上不能发现有移位的Y染色体片段，但H-Y抗原表达说明患者存在Y染色体基因，男性假两性畸形有正常男性核型和双侧睾丸分化，H-Y抗原为阳性，女性假两性畸形为正常女性核形，存在双侧卵巢，H-Y抗原阴性。
（九）其他辅助诊断：
X线骨龄测定，盆腔B超，CT，MRI对于生殖腺体，管道的探查等。
