1.血象
外周血象多在正常范围，偶有白细胞增多伴核左移现象，血沉常增快。
2.病原学检查
(1)直接或染色找病原体：取患者的皮肤，滑膜，淋巴结等组织及脑脊液等标本，用暗视野显微镜或银染色检查伯氏疏螺旋体，可快速作出病原学诊断，但检出率低。
(2)病原体分离：从患者皮肤，淋巴结，血液，脑脊液，关节滑液，皮肤灌洗液等标本分离病原体，其中病变周围皮肤阳性率较高(86%)，分离方法有：
①取标本接种于含6 ml BSK-Ⅱ培养基管内，置33℃培养，检查1次/周，
②将标本接种于金黄地鼠(体重50 g)，1～1.5ml/只，接种后7～14天，无菌解剖，取脾和肾组织研碎，分别接种于BSK-Ⅱ培养基中培养。
(3)PCR技术：依据伯氏疏螺旋体独特的5S～23SrRNA基因结构，设计引物，检测患者血，尿，脑脊液及皮肤标本等莱姆病螺旋体DNA(Bb-DNA)，其敏感水平最高达2×10-4Pg(1个Bb约含2×10-3pgDNA)，并同时可测出所感染菌株的基因型。
3.血清学检测
目前用于莱姆病特异性抗体检测的血清试验，其诊断试剂及检测程序尚缺乏标准化，存在一定的假阴性与假阳性;抗体检测的假阴性也见于在感染后3～4周内的“窗口期”或已用抗生素治疗后的患者，因而必须结合病人的临床表现作出解释。
(1)间接免疫荧光(IFA)试验：可检测血液或脑脊液的特异性抗体，其中IgM抗体≥1∶64为阳性，多在EM发生后2～4周出现，6～8周达高峰，大多数患者4～6个月内降至正常水平，IgG抗体多在病后6～8周内开始升高，4～6个月达高峰，维持数月或数年，国内常以血清抗B31(美国标准菌株)IFA IgG抗体≥1∶128或双份血清抗体效价4倍以上增高者作为诊断依据。
(2)酶联免疫吸附试验(ELISA)：国内应用超声处理及葡聚糖层析纯化的抗确检测特异性抗体，其敏感度与特异性均优于IFA。
(3)蛋白印迹法(western blot)：此法的敏感度与特异性均优于IFA及ELISA，可用此法证实经ELISA，结果可疑者。
4.血液及体液其他检测
血清冷沉淀球蛋白总量常增加100 mg/L以上(正常值为<80 mg/L)，血清免疫球蛋白及补体都有不同程度的增加，伴有心肌或肝脏受累者可同时有ALT及AST增高，神经系统受累者，脑脊液白细胞可增加，以淋巴细胞为主，糖及蛋白变化不大，但免疫球蛋白稍增高。
组织病理：为血管周围和间质的混合细胞浸润，可见淋巴细胞，浆细胞和嗜酸性细胞，Walthin-Starry染色在真皮上部可见螺旋体。
