1.血糖较正常下限为低，<2.8mmol/L即可诊断低血糖。
2.糖化血红蛋白检测>7%，可能提示低血糖呈急性发作;<7%可能有较长时间慢性低血糖经过。
3.血，尿酮体检查：血中酮体增高，尿中酮体阳性提示脂肪分解代谢增强，出现饥饿性酮症。
4.饥饿试验：让患者完全禁食，定时(开始及每4小时)检测血糖，胰岛素，患者不耐受禁食饥饿试验，易出现低血糖反应，一般禁食24小时后约85%阳性，48小时后95%阳性，极少数(约2%)72小时并增加运动才能出现阳性，若禁食后血糖<2.8mmol/L，胰岛素释放指数>0.4者应视为异常。
5.药物激发试验：
(1)甲苯磺丁脲(D860)试验：空腹口服甲苯磺丁脲(D860)2g，为避免胃肠道反应，同时口服等量碳酸氢钠，每1小时采血1次，共3次，测定血糖和胰岛素，正常人血糖下降不超过基础值的40%，如下降低于基础值65%，和(或)用药后血糖水平低于1.7mmol/L(30mg/dl)，持续时间超过3小时，或胰岛素水平高于120µU/ml，则为异常。
(2)胰升糖素试验：空腹快速静脉注射胰升糖素0.03mg/kg体重，总量不超过1mg，测3h血糖和胰岛素，正常人血糖上升超过基础值的40%，若低血糖，胰岛素水平高于150µU/ml，则为异常。
(3)亮氨酸试验：按150mg/kg体重计算亮氨酸剂量，在10min内口服完，测3h血糖和胰岛素水平，正常人血糖不变化，如有低血糖而血胰岛素水平高于40µU/ml，则为异常。
6.C肽抑制试验：给受试者注射外源性胰岛素，以抑制内源性胰岛素分泌，正常人内源性胰岛素明显受抑制，表现为血C肽或胰岛素水平显著下降，常用方法按0.1U/kg计算空腹时静脉注射人胰岛素，然后直接测定血C肽水平，正常人用药后血C肽水平下降值超过基础值的50%，而胰岛素瘤患者血C肽水平比基值下降<50%。
