1.血清叶酸含量： 为反映近期膳食叶酸摄入情况的指标，血清叶酸正常值为11.3～36.3nmol/L(5～16ng/ml)，血清叶酸<6.8nmol/L(3ng/ml)表示缺乏。
2.红细胞叶酸含量 ：为反映体内组织叶酸的储备情况的指标，当红细胞叶酸<318nmol/L(140ng/ml)时表明缺乏。
3.血浆同型半胱氨酸含量： 当受试者维生素B6及维生素B12营养状况适宜时，血浆同型半胱氨酸可作为反映叶酸状况的敏感指标，叶酸缺乏者血中叶酸水平降低，而血浆同型半胱氨酸含量增高，一般以同型半胱氨酸含量>16µmol/L表示高于正常，其正常值为5～15µmol/L，当血浆同型半胱氨酸浓度升高，反应细胞内叶酸水平缺乏或依赖叶酸反应的功能受到损伤，但缺乏特异性，可以通过服用叶酸后血浆同型半胱氨酸浓度迅速下降以验证。
4.骨髓检查： 大细胞性贫血，骨髓中出现特征性巨幼红细胞。
5.放射学检查 ：可发现脊柱裂。
6.B超检查： 可发现脑脊膜膨出，无脑畸形等。
